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胜天半子 · 2023年10月17日 15:48 · 372 次点击
这是一个创建于 1084 天前的主题,其中的信息可能已经发生改变。

鄙人初次涉及细菌培养领域,对其中细节知之甚少,亦在网上查阅了一些资料,得到一些细菌培养的知识,整理成细菌培养的大致流程,但个中细节任然处于茫然阶段,因此恳请各位天涯老哥补充指正:
细菌复苏操作步骤:
①实验操作前先确认菌名及菌号,用75%酒精棉擦拭菌种管和复苏液瓶身;
②按照说明书所述方式打开菌种管,打开复苏液瓶;
③用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于菌种管中将冻干粉全部溶解;
④将溶解后的菌悬液转移至盛有4~5ml液体培养基试管中混匀;
⑤用移液器吸取100μl菌悬液于相应平板培养基上,用接种环在平板上进行划线分离;
⑥同时将液体和平板培养基按照相应的条件进行培养。

细节扩大培养操作步骤:
①种子液培养:在超净台中挑选典型单菌落,置入10ml试管(内有5ml液体培养基)中,在37℃摇床,转速200转培养12小时或者过夜,肉眼能看到试管浑浊。
②提前配置250ml特定培养基,并高温高压灭菌(压力:103.4Kpa;温度:121℃ 20min;含葡萄糖则115℃ 15min);
③吸取3ml种子液到250ml培养基中扩大培养,封口;
④将锥形瓶固定在37℃恒温摇床上,转速200转培养24小时。

2023年10月17日 15:48
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  1. silencesilence
    2023年10月17日 21:38
    1

    操作步骤大致正确,根据实际操作和常见的实验室标准流程,为您补充和指正一些细节:

    细菌复苏操作步骤:
    ① 实验操作前先确认菌名及菌号,用75%酒精棉擦拭菌种管和复苏液瓶身,确保工作台面清洁并进行紫外线消毒。
    ② 在超净台或生物安全柜中操作,按照说明书所述方式打开菌种管,打开复苏液瓶。
    ③ 用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于菌种管中,轻轻摇晃确保冻干粉全部溶解。
    ④ 将溶解后的菌悬液转移至盛有4~5ml液体培养基试管中混匀。
    ⑤ 用移液器吸取100μl菌悬液于相应平板培养基上,用接种环在平板上进行划线分离。
    ⑥ 同时将液体和平板培养基按照相应的条件进行培养,通常是在37℃恒温培养箱中培养。

    细节扩大培养操作步骤:
    ① 种子液培养:在超净台中挑选典型单菌落,置入10ml试管(内有5ml液体培养基)中,在37℃摇床上,转速200转/min培养12小时或者过夜,直到肉眼能看到试管浑浊。
    ② 提前配置250ml特定培养基,并高温高压灭菌(压力:103.4Kpa;温度:121℃ 20min;含葡萄糖则115℃ 15min)。注意:灭菌后需在室温下自然冷却至37℃。
    ③ 在超净台或生物安全柜中操作,吸取3ml种子液到250ml培养基中扩大培养,封口。
    ④ 将锥形瓶固定在37℃恒温摇床上,转速200转/min培养24小时。

    注意事项:
    1. 所有操作都应在无菌条件下进行,尽量避免污染。
    2. 使用的所有仪器和培养基都应经过适当的灭菌处理。
    3. 在操作过程中,尽量避免直接触摸培养基、菌悬液或接种工具的工作部分。
    4. 培养结束后,应及时处理废弃物和清洁工作台面。

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