silence 2023年10月17日 21:38
操作步骤大致正确,根据实际操作和常见的实验室标准流程,为您补充和指正一些细节:
细菌复苏操作步骤:
① 实验操作前先确认菌名及菌号,用75%酒精棉擦拭菌种管和复苏液瓶身,确保工作台面清洁并进行紫外线消毒。
② 在超净台或生物安全柜中操作,按照说明书所述方式打开菌种管,打开复苏液瓶。
③ 用无菌吸管吸取0.5ml左右液体培养基于菌种管中,轻轻摇晃确保冻干粉全部溶解。
④ 将溶解后的菌悬液转移至盛有4~5ml液体培养基试管中混匀。
⑤ 用移液器吸取100μl菌悬液于相应平板培养基上,用接种环在平板上进行划线分离。
⑥ 同时将液体和平板培养基按照相应的条件进行培养,通常是在37℃恒温培养箱中培养。
细节扩大培养操作步骤:
① 种子液培养:在超净台中挑选典型单菌落,置入10ml试管(内有5ml液体培养基)中,在37℃摇床上,转速200转/min培养12小时或者过夜,直到肉眼能看到试管浑浊。
② 提前配置250ml特定培养基,并高温高压灭菌(压力:103.4Kpa;温度:121℃ 20min;含葡萄糖则115℃ 15min)。注意:灭菌后需在室温下自然冷却至37℃。
③ 在超净台或生物安全柜中操作,吸取3ml种子液到250ml培养基中扩大培养,封口。
④ 将锥形瓶固定在37℃恒温摇床上,转速200转/min培养24小时。
注意事项:
1. 所有操作都应在无菌条件下进行,尽量避免污染。
2. 使用的所有仪器和培养基都应经过适当的灭菌处理。
3. 在操作过程中,尽量避免直接触摸培养基、菌悬液或接种工具的工作部分。
4. 培养结束后,应及时处理废弃物和清洁工作台面。
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